Cercetare

Bolile reumatice autoimune sistemice se caracterizează prin prezența unor niveluri crescute de autoanticorpi la proteinele intracelulare și acizii nucleici. Acești autoanticorpi sunt în general numiți anticorpi antinucleari (ANA) deoarece sunt direcționați în primul rând împotriva antigenelor nucleare, dar includ și anticorpi împotriva citoplasmei celulei.

sunt îndreptate

Detectarea ANA în sânge are o sensibilitate ridicată, motiv pentru care este cel mai bun test de screening pentru bolile sistemice ale țesutului conjunctiv. Prevalența ANA la acești pacienți este cuprinsă între 20 și 100%. Pentru a identifica bolile reumatice, este foarte important să se distingă diferiții anticorpi din grupul ANA. În prezent sunt descrise două categorii principale de anticorpi antinucleari:

  1. Autoanticorpi care vizează ADN și histone;
  2. Autoanticorpi care vizează antigeni nucleari solubili (antigeni nucleari extractibili - ENA).

Varietatea antigenelor țintă pentru anticorpii antinucleari este extrem de mare. Prin urmare, în prezența unui rezultat pozitiv în studiul anticorpilor antinucleari generali, este necesar să se examineze anticorpi specifici care direcționează diagnosticul către o anumită boală autoimună. Utilizarea imunoblotului ANA are avantajul examinării profilurilor extinse de autoanticorpi. Acest lucru permite diferențierea a 16 anticorpi diferiți din grupul ANA.

Tipuri de anticorpi antinucleari

Anticorpi anti-U1nRNP sunt îndreptate împotriva antigenelor ribonucleoproteice mici (snRNP). Sunt caracteristice bolii Sharpe (boala mixtă a țesutului conjunctiv);

Anticorpi anti-Sm sunt direcționate către antigenul Sm numit după primul pacient (Stephanie Smith). Antigenul Sm face parte din grupul snRNP. Lupusul eritematos sistemic este caracteristic bolii;

Anticorpi anti-SS-A (Ro) sunt direcționate împotriva unui antigen care face parte, de asemenea, din substanța solubilă A snRNP sau a grupului antigen Robert. Acestea sunt caracteristice bolii sindromul Sjögren și lupusul. Acestea traversează bariera placentară și intră în fluxul sanguin al fătului și pot provoca lupus eritematos sistemic congenital, precum și blocaj AV congenital la făt. Acest lucru necesită examinarea lor la femeile însărcinate;

Anticorpi anti-SS-B (La) sunt îndreptate împotriva unei proteine ​​care joacă un rol în transcrierea ARN polimerazei III - substanță solubilă B sau antigen Lane. Sunt caracteristice sindromului bolii Sjogren;

Anticorpi anti-Ro52 sunt direcționate împotriva antigenului de 52 kDa și sunt descrise ca autoanticorpi nespecifici asociați atât cu boli reumatice, cât și cu boli nereumatice. Sunt caracteristice sindromului Sjögren;

Anticorpi anti-Scl-70 sunt îndreptate împotriva unei proteine ​​non-histonice de 70 kDa. S-a constatat că această proteină este un produs al degradării ADN de către enzimele topoizomerazei I de clasa I localizate în nucleoplasmă și nucleoli având funcția de a menține integritatea informațională a ADN-ului. Boala se caracterizează prin scleroză sistemică progresivă (Sclerodermie);

Anticorpi anti-PM-Scl sunt îndreptate împotriva proteinelor complexului nuclear PM-Scl. Antigenii principali sunt 2 polipeptide cunoscute sub numele de PM-Scl 75 și PM-Scl 100. Cei doi antigeni sunt independenți unul de celălalt și nu interacționează încrucișat. Acest complex proteic este implicat în biosinteza ribozomului. Acești anticorpi sunt asociați cu sindromul suprapunerii sclerodermiei cu polimiozită/dermatomiozită;

Anticorpi Jo-1 sunt îndreptate împotriva enzimei histidil-t-ARN sintetază. Anticorpii împotriva Jo-1 sunt un marker serologic pentru boala dermatomiozită/polimiozită, cu o prevalență în rândul pacienților între 20-40%. Prezența acestor autoanticorpi este asociată cu o formă mai severă a bolii și recidive mai frecvente. Autoanticorpii pot fi detectați devreme, uneori înainte ca simptomele să înceapă;

Anti-CENP în anticorpi sunt îndreptate împotriva unei proteine ​​situate în regiunea de atașare a fusului de divizare în timpul diviziunii celulare. Toate serurile de sânge care conțin anticorpi anticentromerici au reacționat cu CENP-B. Anticorpii împotriva CENP B sunt un marker serologic pentru sindromul CREST (Calcinoză, Raynaud, Esofagită, Telangiectazie), care este un subtip de scleroză sistemică progresivă (Sclerodermie) .Au o specificitate de 70-90%. Ele pot apărea și la pacienții cu ciroză biliară primară;

Anticorpi PCNA (antigen celular proliferant) sunt îndreptate împotriva unei proteine ​​care face parte din enzima ADN polimerază și astfel participă la procesul de duplicare și reparare a ADN-ului. Acest antigen se mai numește ciclină I, care joacă, de asemenea, un rol în reglarea ciclului celular. Detecția sa în imunofluorescență indirectă este variabilă (granulară/colorată), jumătate din nucleele celulare având o saturație scăzută. Anti-PCNA este detectat la 3% dintre pacienții cu lupus eritematos sistemic;

Anticorpi împotriva ADN-ului dublu catenar reacționează cu componentele majore ale acidului dezoxiribonucleic bicatenar (ADN). Acești anticorpi sunt un marker cu specificitate ridicată pentru lupusul eritematos sistemic, prezent la aproximativ 60% (30-90%) dintre pacienți. Este, de asemenea, un marker pentru monitorizarea activității clinice a bolii. Ele pot fi, de asemenea, asociate în procente mici cu lupusul indus de medicamente, artrita reumatoidă și sclerodermia;

Anticorpi antinucleozomali. Proteinele din nucleul celular sunt compuse din 40% ADN, 40% histone și 20% proteine ​​non-histonice. Anticorpii antinucleozomiali reacționează cu partea expusă, adică cu ADN-ul cromatinei. Studiile clinice au arătat că acești anticorpi apar înainte de prezența anticorpilor împotriva ADN-ului dublu catenar la pacienții cu lupus eritematos sistemic;

Anticorpi antihistonii reacționează împotriva histonelor, care împreună cu ADN-ul constituie principalele componente ale proteinelor din nucleul celular.

Anticorpii antihistonii se găsesc la aproximativ 95% dintre pacienții cu lupus eritematos indus de medicamente și reprezintă cel mai important criteriu de diagnostic. Cele mai frecvente medicamente implicate în inducerea lupusului sunt: ​​Procainamida, Hidralazina, Isoniazida, Carbamazepina, Penicilamina, Clorpromazina, Alfa metildopa, Chinidina, Salazosulfapiridina, Minociclina. Anticorpii antihistonii pot fi prezenți ani de zile după oprirea medicamentului;

Anticorpi împotriva proteinelor ribozomale P sunt îndreptate împotriva a 3 proteine ​​ribozomale. Acești anticorpi sunt un marker pentru neurolupus (care afectează sistemul nervos central și periferic de la lupus);

Anticorpi antimitocondriale AMA M2 sunt îndreptate împotriva unei părți a enzimei piruvat dehidrogenază. Titrul crescut confirmă diagnosticul cirozei biliare primare și poate avea valoare de prognostic pentru dezvoltarea ulterioară a bolii la pacienții cu semne de stază biliară. Anticorpii anti-M2 pot fi detectați și în sindromul suprapus al cirozei biliare primare cu hepatită autoimună, scleroză sistemică (6%) și sindromul Sjögren;

Anticorpi anti-DFS70 sunt îndreptate împotriva unui activator al enzimei care catalizează transcrierea genelor din celulă. Anticorpii anti-DFS70 au fost legați de diferite afecțiuni patologice, cum ar fi dermatita atopică și cancerul de prostată. Cea mai mare prevalență a anticorpilor împotriva DFS70 a fost raportată la pacienții cu sindrom Vogt-Harada (66,7%), tiroidită autoimună (55%), dermatită atopică (30%).

Ce necesită cercetarea? ?

Imunoblotarea anticorpilor antinucleari (împotriva antigenelor U1-NRNP, SS-A, RO-52, SS-B, SCL-70, PM-SCL, JO-1, CENTROMER B, PCNA, ADN bicatenar, NUCLEOZOMI, HISTONI, RIBOSOMALEN P PROTEIN, AMA M2, DFS70) se efectuează atunci când medicul dumneavoastră suspectează prezența unei boli sistemice autoimune a țesutului conjunctiv (colagenoză). Studiul este, de asemenea, utilizat pentru a evalua gradul de activitate al bolilor, cum ar fi lupusul eritematos sistemic, scleroza sistemică progresivă (sclerodermie), sindromul Sjögren, polimiozita/dermatomiozita și sindromul Sharpe (boala mixtă a țesutului conjunctiv).

Scopul studiului

Testul urmărește să determine nivelul anticorpilor antinucleari specifici împotriva structurilor din nuclei și citoplasma celulelor dumneavoastră.

Studiul este folosit pentru diagnosticul și evaluarea activității bolii anumitor boli autoimune, cum ar fi: lupus eritematos sistemic, lupus indus de medicamente, sclerodermie, sindrom Sjögren, polimiozită/dermatomiozită și sindrom Sharpe și sindroame suprapuse între diferite boli autoimune.

Când este necesar să se facă această cercetare?

Testul este recomandat de un medic dacă aveți simptome precum: înroșirea fluturii a pielii feței și a decolteului, senzație de etanșeitate și strângere a pielii de pe față și degete, fotosensibilitate crescută, fenomenul Raynaud (paloare, vânătăi) (roșeață a feței). degetele în contact cu frigul), durere și umflături la nivelul articulațiilor, apariția unor pete roșii pe piele, slăbiciune musculară a mușchilor coapsei și umerilor și altele.

Pregătirea înainte de examinare

Nu este necesară pregătirea prealabilă a pacientului înainte de studiu. Rezultatul testului nu este afectat de alimente, apă sau alte băuturi.

Probă de testare

Metodă

Testul folosește 16 antigeni purificați care sunt fixați paralel între ei pe membrana benzii. Antigenele sunt prezentate în următoarea ordine de fixare pe bandă:

  • nRNP/Sm: antigen nativ purificat
  • Vedea: antigen nativ purificat
  • SS-A: antigen nativ purificat
  • Ro 52: Antigen recombinant
  • SS-B: antigen nativ purificat
  • Scl-70: Antigen nativ purificat
  • PM/Scl: antigen recombinant
  • Jo-1: antigen nativ purificat
  • CENP B: antigen recombinant
  • PCNA: Antigen recombinant
  • ds ADN: antigen nativ purificat
  • nucleozomi: antigen natural
  • histone: antigen nativ purificat
  • Proteina P-ribozomală: antigen natural
  • AMA-M2: Antigen nativ purificat
  • DFS70: Antigen recombinant

Valori de referinta:

Interpretarea finală a rezultatelor testului se realizează cu ajutorul unui software (după scanarea casetelor), care, în funcție de intensitatea semnalului, evaluează fiecare parte a benzii după cum urmează:

Intensitate Evaluarea intensității REZULTAT
Nici un semnal 0-5 0 Negativ
Semnal scăzut 6-10 (+) Îndoielnic
Semnal de intensitate medie 11-25 sau 26-50 + ++ Pozitiv
Semnal foarte intens > 50 +++ Foarte pozitiv

Rezultat pozitiv confirmă prezența anticorpilor specifici.

Semnalul slab indică faptul că prezența autoanticorpilor este incertă și îndoielnică. În funcție de simptomele pacientului, testul poate fi repetat la fiecare 1-2 luni.

Rezultatul negativ indică absența autoanticorpilor specifici.

  • nRNP/Sm: negativ
  • Vedea: negativ
  • SS-A: negativ
  • Ro 52:negativ
  • SS-B: negativ
  • Scl-70: negativ
  • PM/Scl: negativ
  • Jo-1: negativ
  • CENP B: negativ
  • PCNA: negativ
  • ds ADN: negativ
  • nucleozomi: negativ
  • histone: negativ
  • Proteina P-ribozomală: negativ
  • AMA-M2: negativ
  • DFS70: negativ