Defecte ale ouălor și influența acestora asupra rezultatului final al procedurii in vitro sau „De ce nu fiecare ouă naște un copil?”

Tehnologia fertilizare in vitro constă în fertilizarea ouălor mature (etapa Metafaza II), obținerea embrionilor și returnarea acestora în cavitatea uterină a destinatarilor pentru a fi implantate și a duce la sarcină. Calitatea ovulelor afectează în mod direct fertilizarea și competența embrionilor pentru dezvoltarea lor ulterioară. Criteriile care indică calitatea ouălor sunt împărțite în: morfologic, celular și molecular. Criteriile morfologice pentru calitatea ovulului sunt utilizate înainte de fertilizarea in vitro, deoarece calitatea ovulului are cel mai mare impact asupra rezultatelor fertilizării ICSI, dezvoltării timpurii și implantării embrionilor. Prin urmare, calitatea ouălor este un factor determinant în fertilizarea lor, cultivarea embrionilor de înaltă calitate și tratamentul infertilității.

asupra

În mod curios, în cele două metode de fertilizare utilizate într-un laborator embriologic, calitatea ouălor este determinată diferit. În fertilizarea in vitro convențională (clasică) (FIV), evaluarea morfologică a ouălor îndepărtate după puncția foliculară se efectuează pe un stereomicroscop pe baza tipului de celule cumulus care înconjoară fiecare ou.

Cu toate acestea, în cazul fertilizării ICSI, calitatea fiecărui ou este determinată cu un microscop inversat cu mărire mare după ce oul a fost expus (toate celulele cumulus din jur și celulele corona radium au fost eliminate cu ajutorul enzimei hialuronidază) și se evaluează citoplasma și incluziunile sale, spațiul perivitelinic și zona pelucidă în sine. Această evaluare oferă informații cu privire la stadiul de dezvoltare a ovulului [vezicula germinală (VG) a profazei I, metafaza I (MI) sau metafaza II (MII)] și calitatea [semne de degenerare citoplasmatică, corp polar (PB) sau zona pelucidă ].

Ulterior, toate ovulele MII sunt supuse fertilizării ICSI și potențialul de dezvoltare a embrionilor rezultați este prezis numai pe baza propriei lor mofologii deja, indiferent de calitatea determinată anterior a ovulelor din care au fost derivate. Rezultatul final al fertilizării ICSI depinde de calitatea ouălor îndepărtate.

Fecundarea normală și dezvoltarea timpurie a embrionilor se observă chiar și la ouăle cu defecte și morfologie anormală a citoplasmei, dar embrionii rezultați nu au același potențial de implantare ca cei obținuți din ouăle cu citoplasmă normală.

Foto 4: Ou fertilizat cu morfologie slabă

După îndepărtarea celulelor cumulus și corona radium, principalele anomalii morfologice observate sunt granulații extrem de ridicate, incluziuni citoplasmatice, cum ar fi vacuole, grupuri de reticul endoplasmatic neted, corpuri refractile și necrotice.

Ouăle normale au o citoplasmă curată, cu o textură uniformă și granulație fină omogenă.

Masa. 1 Criterii care arată calitatea ovulelor

Criteriu

Parametrii

Complex Cumulus-vegetal (COC)

Compacitatea și grosimea (densitatea) cumulului înconjurător, luminozitatea citoplasmei

Granulare, colorare, regiuni cu grupuri de organite

Corp polar (PB)

Formă (rotundă sau ovală), dimensiune (mare sau mică), suprafață (netedă sau aspră), citoplasmă (intactă sau fragmentată)

Zona pelucidă (ZP)

Spațiu periwinkle (PVS)

Mărimea (normală sau mărită), prezența sau absența incluziunilor granulare

Maturarea meiotică a ovulului

Maturarea ovocitelor implică două procese corelate: maturarea nucleară și citoplasmatică.

După stimulare, ouăle reinițiază (încep din nou) meioza. Nucleul oului își schimbă structura. Membrana nucleară a oului dispare. Microtubulii sunt organizați într-un fus bipolar și toți cromozomii sunt dispuși la ecuatorul celulei. Prima diviziune meiotică continuă în ovul; după divizare, primul corp polar se separă și intră în spațiul perivitelinic. Apoi începe a doua diviziune meiotică, care se oprește în Metafaza II. Acest proces este cunoscut sub numele de maturare nucleară a oului.

Pentru a fertiliza cu succes un ou după ICSI și pentru a dezvolta un nou organism, nucleul și citoplasma oului trebuie să fie maturi în același timp. Dacă citoplasma oului este imatură, embrionul nu s-ar putea dezvolta normal după fertilizare. Maturitatea citoplasmei ovulului este dovedită când la 16-18 ore după ICSI observăm fertilizarea și apoi dezvoltarea embrionului in vitro.

Complexe cumul-ovocite (COC): Se observă și se evaluează expansiunea cumulusului și a coroanei separat. Complexele cumul-ovocite sunt clasificate în funcție de compactitatea cumulului și de caracteristicile citoplasmei ovulelor. Numărul de straturi de celule cumulus este un factor determinant pentru calitatea ouălor. Calitatea ouălor este mai bună atunci când ouăle sunt înconjurate de mai multe straturi de celule.

Poza 5, 6: Complexe cumul-ovocite

Citoplasma și corpul polar: Înainte de ICSI, după determinarea calității complexelor cumulus-ovocite, celulele cumulus în sine au fost îndepărtate folosind enzima hialuronidază. Acest lucru oferă multe oportunități pentru o evaluare mai bună (exactă) a structurii oului. Citoplasma ouălor umane este calcificată în funcție de culoarea, granulația sa (granule mari sau mici; distribuție omogenă sau grupată a granulelor; în centrul sau periferia oului), mărimea spațiului perivitelinic și distribuția organelor (vacuole, reicula endoplasmatică).

Fotografii 7, 8, 9, 10: Ouă cu citoplasmă granulată central

Imagini 11, 12: Oocite cu corpuri refractare

Fotografii 13, 14, 15: Oocite cu corpuri necrotice

Poza 16, 17, 18, 19: Ouă cu vacuole/clustere din EPR

Foto 20, 21: Ouă vacuolizate după injectarea intracitoplasmatică a unui singur spermă (ICSI)

Conform acestor criterii morfologice, ouăle umane sunt clasificate ca: 1) ouă normale, 2) ouă cu anomalii extracitoplasmatice (zona întunecată a spațiului pelucid și mare perivitelial), 3) ouă cu anomalii intracitoplasmatice (citoplasmă întunecată sau granulară), anomalii citoplasmatice în forma ovulelor și 5) ovule cu un număr mare de anomalii (combinație de defecte morfologice diferite).

Imagini 22, 23: Oocite cu un spațiu perivitelial mare

Imaginea 24: Un ovul cu o zonă pelucidă întunecată și deformată

Fotografii 25, 26: Oocite cu formă de zonă deformată și corpuri refractare

Imagini 27, 28, 29, 30, 31, 32: Oocite cu o combinație de defecte morfologice (spațiu perivitelial mare, zonă pelucidă subțire, vacuole, corpuri necrotice, corpuri polare fragmentate, agregare centrală a granulelor în citoplasmă)

Poza 33: Ou cu formă deformată, vacuole granulate în spațiul perivitelial

Morfologia primului corp polar indică (arată) vârsta post-ovulatorie a oului uman. Degenerarea primului corp polar indică un ou la bătrânețe. Unele criterii morfologice ale primului corp polar, cum ar fi forma (rotundă sau ovală), dimensiunea (mare sau mică), suprafața (netedă sau crestată) și integritatea citoplasmatică (intactă sau fragmentată) sunt de asemenea utilizate pentru a evalua calitatea ouălor. Ouăle cu un corp polar fragmentat se dezvoltă mai rău după fertilizare decât cele cu un corp polar normal.

Ouăle cu corpuri polare imense nu sunt în majoritatea cazurilor normale din punct de vedere genetic și după injectare prezintă semne de fertilizare atipică (prezența a mai mult de 2 pronuclei în citoplasmă).

Imaginea 34: Un ou cu un corp polar gigant care prezintă semne de fertilizare atipică (3PN)

Spațiul perivitelinic și zona pelucidă: spațiul perivitelinic (PVS) al ouălor umane poate varia în mărime (mărită sau nu) și conținut (prezența și absența boabelor). S-a demonstrat că ouăle cu spații mari de perivitelină se dezvoltă mai rău după ICSI decât cele cu spațiu normal de perivitelină. Ouăle care au boabe foarte mari în spațiul perivitelial se dezvoltă, de asemenea, mai rău după fertilizare decât cele fără astfel de boabe.

Imaginea 35: Un ou cu o zonă pelucidă spartă - puteți vedea un ou care este deja în afara zonei (FZ - zona fragilă)

Grosimea zonei pelucide variază de la 10 la 31 µm și acest lucru nu este legat de diametrul citoplasmei. Grosimea zonei pelucide afectează penetrarea spermei în ou. Acest lucru este deosebit de important în fertilizarea clasică in vitro, unde grosimea zonei pelucide trebuie să fie mai mică de aproximativ 19-20 µm. Zona îngroșată (22 µm și mai mult) este o indicație pentru utilizarea fertilizării ICSI după experimentele anterioare nereușite de fertilizare in vitro cu fertilizare in vitro clasică. Grosimea zonei pelucide nu afectează dezvoltarea embrionului după ICSI.

Ouă uriașe - Ouă uriașe au un diametru de aproximativ 30% mai mare decât ouăle normale. Acestea apar la femeile de toate vârstele - de la 22 la 44 de ani și peste, cu o frecvență de aproximativ 0,3%, iar odată cu vârsta procentul crește și poate ajunge la 1%. Dacă un astfel de ou este fertilizat, în majoritatea cazurilor se obține un embrion triploid. Deoarece sunt o sursă de triploidie datorată diploidiei ovulelor și pentru a evita avorturile nedorite, astfel de ovule nu sunt injectate în timpul unei proceduri in vitro. Embrionii derivați din ouă uriașe prezintă numeroase aberații cromozomiale și a fost dovedită prezența nucleelor ​​triploid/tetraploid, precum și a diferitelor tipuri de mozaicism și, prin urmare, acești embrioni nu sunt transferați in vitro.

Poza 36: Ou gigant

În concluzie, înainte de fiecare procedură de fertilizare a ouălor, calitatea acestora trebuie să fie bine definită, deoarece are un impact uriaș asupra dezvoltării embrionilor după aceea. Calitatea este determinată cel mai precis utilizând o observare complexă a caracteristicilor în același timp a structurii complexului cumulus, a citoplasmei ovulului, a corpului polar, a spațiului perivitelinic și a zonei pelucide.

[font font = "verdana" font_size = "16" bgcolor = "#" color = "# 333" bcolor = "# dd3333 ″ arrow =" yes "] De ce sunt congelate ouăle umane? [/ quote]