Citeste mai mult

Metode de cercetare

Cele două metode standard recomandate pentru determinarea stării HER2 în cancerul de sân sunt:

  • metoda imunohistochimică (IHC)
  • metoda de hibridizare in situ (ISH)

Determinarea imunohistochimică este o metodă cantitativă care determină numărul relativ de receptori HER2 de pe membrana celulară. Cu cât acești receptori sunt mai mulți, cu atât este mai intensă colorarea probei.
Determinarea se bazează pe legarea receptorilor HER2 (adică antigenul) la un anticorp și colorarea ulterioară a complexelor. Intensitatea colorării este comparată cu standardele și astfel se determină gradul său.

Metoda IHC este mai ușor de implementat și are o valoare financiară mai mică decât hibridizarea in situ. Există o suprapunere aproape completă a rezultatelor între cele două metode [1]. Prin urmare, IHC a fost stabilit ca o metodă de „prima linie” pentru testarea statusului HER2 în cancerul de sân.

Diagrama de mai jos arată cum este raportată expresia proteinei HER2 cu IHC și cum sunt interpretate rezultatele posibile:

metode

* Dacă nu există niciun motiv pentru a suspecta inadecvarea materialului și nu se observă nicio discrepanță între tipul histologic de carcinom și rezultatul testului.

  • 2+ colorare a membranei în cancerul de sân

  • 3+ colorare a membranei în cancerul de sân


Hibridizarea in situ este a doua metodă standard recomandată de ASCO/CAP pentru determinarea statusului HER2 în cancerul de sân. ISH măsoară amplificarea HER2 gena care este aproape întotdeauna cauza supraexprimării receptorului HER2.

ISH este o metodă mai costisitoare și mai dificil de implementat decât IHC. Prin urmare, se recomandă utilizarea acestuia ca studiu reflex atunci când statusul HER2 nu poate fi determinat fără echivoc de imunohistochimie (adică la valoarea IHC 2+).

Au fost dezvoltate mai multe tehnici ISH diferite:

  • FISH - hibridizare fluorescentă in situ
  • CISH - hibridizare cromogenă in situ

  • SISH - hibridizare in-situ argint (ISH întărit cu argint)

  • Măsurarea poate fi efectuată cu una sau două sonde (Dual ISH). Toate tehnicile, cu excepția FISH, utilizează un câmp luminos ISH.


Tabelul de mai jos oferă recomandări ASCO/CAP cu privire la modul de a explica amplificarea genei HER2 cu ISH cu una sau două sonde și modul de interpretare a rezultatelor posibile [1].



Algoritm optim ASCO/CAP pentru evaluarea stării HER2 cu ISH în cancerul de sân [1].

Starea HER2

ISH cu o singură sondă

ISH cu două sonde

Numărul mediu de copii ale genei HER2 ≥ 6,0 semnale per celulă

Numărul mediu de copii ale genei HER2 ≥ 4,0 și ˂ 6,0 semnale per celulă

1. Raport HER2/ CEP17 ˂ 2.0 cu număr mediu de copii ale HER2 gene ≥ 4.0 și ˂ 6.0 semnal/celulă

2. Raport HER2/ CEP17 ≥ 2.0 cu numărul mediu de copii ale HER2 gena ˂ 4.0 semnal/celulă

3. Raport HER2/ CEP17 ˂ 2.0 cu număr mediu de copii ale HER2 gena ≥ 6,0 semnal/celulă

Numărul mediu de copii ale genei HER2 signals 4.0 semnale per celulă

Raport HER2/ CEP17 ˂ 2.0 cu număr mediu de copii ale HER2 gena ˂ 4.0 semnal/celulă


Studiul ISH ar trebui să fie declarat nedeterminat și repetat în următoarele cazuri [1]:

  • Comenzile nu îndeplinesc așteptările
  • Testatorul nu poate detecta și măsura cel puțin două zone ale tumorii invazive
  • Mai mult de 25% din semnale nu pot fi raportate din cauza unui semnal slab
  • Mai mult de 10% din semnale se găsesc deasupra citoplasmei
  • Rezoluția nucleară este slabă
  • Autofluorescența este puternică

Aproximativ 10% din tumorile HER2 + sunt heterogene HER2 și, prin urmare, amplificarea este observată numai în anumite zone ale probei. Prin urmare, înainte de efectuarea determinării ISH, întregul material trebuie examinat cu atenție și selectată o zonă de studiu [1,2].
În plus, se recomandă utilizarea unui test ICH pentru a detecta zone din material în care este probabil să fie detectată amplificarea HER2.
În plus, pentru fiecare grup separat de celule amplificate> 10% din toate celulele, trebuie efectuat un număr separat de 20 de celule care nu se suprapun și rezultatul raportat separat.

În cazuri rare, eterogenitatea tumorii poate afecta, de asemenea, testarea IHC prin observarea unei zone mai mici de 10% din eșantion, care are colorare intensă. În acest caz limită, se recomandă un test IHC pe un alt eșantion sau numirea unui test reflex cu ISH [2].


Eșantioane fals pozitive și negative negative. IHC/ISH nepotrivire

Determinarea HER2 cu ICH și/sau ISH este un proces în mai multe etape și capricios, care prezintă un risc considerabil de a obține rezultate fals pozitive și fals negative. Pentru a nu compromite tratamentul din cauza unui test greșit, se recomandă respectarea protocoalelor validate în toate etapele procesului.
Este necesar un control strict al calității și identificarea cazurilor speciale a căror măsurare HER2 necesită o atenție specială.

Oncologii și patologii ar trebui să fie conștienți de caracteristicile și rezultatele histopatologice ale testului HER2 care necesită un nou test HER2. (vezi Tabelul 2 și referințele [1,3]).

Ar trebui să existe o corespondență extrem de mare între rezultatele testelor IHC și ISH - aproximativ 98% [1-4].
Dacă în laborator se observă o discrepanță ≥ 3-4% între cele două metode, ar trebui comandat un audit pentru a afla care dintre cele două metode este compromisă și dă prea multe rezultate false pozitive sau negative. Problema ar trebui, de asemenea, identificată [4].

Între 15% și 20% din carcinoamele cancerului de sân sunt HER2 pozitive. Dacă măsurătorile de laborator raportează starea HER2 + în mai puțin de 14% sau mai mult de 20% din probe, acesta este un semn clar că metodologia poate fi compromisă