examen

Histochimia - chimia în contextul țesutului biologic - este un set neprețuit de tehnici utilizate pentru vizualizarea structurilor biologice. Acest domeniu este situat la interfața chimiei organice, biochimiei și biologiei. Integrarea acestor discipline în secolul trecut a permis imagistica celulelor și a țesuturilor folosind microscopia. Astăzi, folosind mediile chimice unice din celule, tehnici de expresie heterologă și activitate enzimatică, metodele histochimice pot fi utilizate pentru a vizualiza structurile din materia vie.

Scopul histochimiei este de a oferi culoare și contrast imaginilor microscopice. Domeniul folosește diferite tehnici pentru a efectua etichetarea specifică a structurilor biologice. Histochimiștii provoacă utilizarea petelor celulare cu molecule mici, molecule marcate, cum ar fi anticorpii, și detectarea mediată de enzime și îmbunătățirea semnalului. Din punct de vedere istoric, însă, histochimia a fost sinonimă cu imagistica celulelor și țesuturilor fixe (adică moarte). Apariția tehnicilor de manipulare genetică extinde semnificativ metodele histochimice la celulele vii.

Metodele histochimice sunt utilizate pe scară largă în examinarea și diagnosticul morfologic. Prin intermediul acestora, la nivel intracelular, celular și țesut, sunt monitorizate procesele chimice și modificările care apar în timpul ciclului de viață în organism. Importanța lui este deosebit de mare examen histochimic în diagnosticul tumorilor tractului gastro-intestinal, ale pielii, plămânilor, rinichilor, uterului și altele.

Cele mai moderne metode de cercetare histochimică utilizate cu succes în ultimii ani în oncologie sunt imunohistochimice. Cu ajutorul acestor metode, se efectuează nu numai tipizarea imunologică a diferitelor tumori, ci și un diagnostic diferențial al tumorilor de diferite tipuri histogenetice, detectarea metastazelor în ganglionii limfatici și măduva osoasă și altele. În acest fel, ajută la rezolvarea afilierii țesuturilor și organice și a posibilului prognostic al bolii.

Studiile imunohistochimice se bazează pe conceptul că celulele neoplazice exprimă un program de diferențiere similar programului de diferențiere a sursei histogenetice putative a tumorii. Examinarea imunohistochimică prin markeri epiteliali, mezenchimali, limfocitari și alți markeri poate ajuta la exprimarea și caracterizarea exactă în secțiunile de țesut ale celulelor tumorilor de grad scăzut sau metastazelor acestora.

Cu ajutorul anticorpilor monoclonali la proteinele produselor epiteliale, mezenchimale sau limfoide, care respectă anumite reguli, reflectând tipul și starea de diferențiere a celulelor respective, apartenența speciilor celulelor tumorale poate fi dovedită cu mare probabilitate, în special în cazurile în care nu este posibil la microscopul cu lumină sau prin metode histochimice standard.

În principiu, toate examinările histochimice pot fi efectuate pe diferite materiale histologice:

  • cadavru
  • animal
  • postoperator
  • amprentele digitale
  • frotiuri
  • culturi de țesuturi

Cerințele pentru preluarea materialului de cercetare sunt:

  • realizare rapidă maximă
  • să fie suficient ca cantitate și dimensiune nu mai puțin de 0,5 centimetri cubi
  • materialul nu trebuie abuzat și tăierea trebuie făcută cu un cuțit ascuțit
  • este necesar să aveți materiale din diferite secțiuni pentru a compara rezultatele

Pentru a păstra structura vitală a țesuturilor și celulelor și conținutul de substanțe chimice din ele, este necesar ca materialul să fie fixat. Fixatorul oprește reacțiile chimice din celule și țesuturi după separarea lor de corp, previne autoliza și se descompune sub influența factorilor de mediu.

Alegerea fixativului este determinată de scopul studiului, de tipul de material, de proprietățile chimice ale substanțelor studiate și de timpul disponibil patologului. Se folosesc aceiași fixatori ca și pentru examenul histologic.

Congelarea secțiunilor este, de asemenea, utilizată ca metodă de fixare - proaspătă sau fixată pe țesături cu vapori de formalină. Pentru realizarea secțiunilor histologice se folosește un microtom sau criostat de îngheț. Principalele grupe de substanțe și produsele lor care pot fi dovedite prin metodele de analiză histochimică sunt glucidele, lipidele, enzimele proteice și altele.

Mai jos sunt metodele de colorare utilizate în examen histochimic: